产品名称：pEGFP-ADRB2（human）质粒

产品规格：0.5μg质粒干粉

在收到产品后，请根据管壁标签判断具体产品形式，并在扩增之前仔细检查该质粒菌株的抗性、感受态及培养温度。以下是人生就是博-尊龙凯时提供的EGFP-ADRB2（human）质粒扩增流程：

1. 质粒干粉（常温运输，存储于-20℃，保质期90天）

请务必进行转化挑单克隆培养，切勿直接使用或进行测序：

1. 收到质粒干粉后，先进行5000rpm离心1分钟，然后加入20μl去离子水以溶解质粒；
2. 取1支100μl感受态细胞，在冰上解冻10分钟，加入2μl质粒，随后冰浴30分钟，再以42℃热激60秒，最后冰浴2分钟（操作过程请在超净工作台内无菌进行）；
3. 加入900μl无抗的LB液体培养基，以180rpm震荡在37℃培养45分钟；
4. 以6000rpm离心5分钟，仅保留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上（建议使用本平台的专用涂布玻璃珠，以获得更多转化子）；
5. 平板正向培养1小时，再倒置于37℃培养14小时。如需30℃培养，则需延长至20小时；若菌落过多，可选择稀释质粒再转化；如无菌落，可尝试再加入10μl质粒进行转化。切勿直接转表达感受态，应先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态；
6. 挑取单个菌落至LB液体培养基中，加入相应抗生素，以220rpm震荡培养14小时，之后根据实验需求和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2. 甘油菌种（冰袋运输，存储于-80℃，保质期90天）

请进行划线挑单克隆培养，酵母菌需先液体复苏再进行四区划线，最后再挑取单个菌落进行液体培养。

3. 穿刺菌种（冰袋运输，存储于4℃，保质期7天）

进行穿刺接种，液体培养后四区划线，挑取单个菌落进行液体培养。

4. 菌落平板（冰袋运输，存储于4℃，保质期7天）

直接挑取单个菌落至液体培养基中。

5. 液体质粒（冰袋运输，存储于-20℃，保质期90天）

单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

6. 滤纸质粒（常温运输，存储于-20℃，保质期90天）

收到后，将滤纸圆形部分剪下放入EP管中，添加100μl无菌水，使滤纸浸湿并浸泡5分钟，然后吸取5μl质粒进行转化，离心全涂。

实验原理与步骤

本产品的质粒提取采用碱裂解法，通过共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA的拓扑学差异进行分离。在特定pH条件下，线性DNA解开并变性，而质粒DNA则能保持其完整性。此法可有效提取高纯度的质粒：

1. 准备20ml灭菌培养管，编号，加入8ml LB培养基和8µl相应抗生素；
2. 用10µl枪头挑取单个菌落至培养管中，37℃震荡过夜；
3. 取2ml过夜培养的菌液加入离心管，10000rpm离心2分钟，去除上清；
4. 在离心管中加入250µl Buffer P1（含RNase A），充分混匀；
5. 加入250µl Buffer P2，轻轻混匀4~6次，获得澄清的裂解液；
6. 加入350µl Buffer N3，轻轻混匀，此时会出现白色沉淀，10000rpm离心15分钟；
7. 将上清液转移至吸收柱中，10000rpm离心1分钟，确保裂解物完全通过；
8. 添加Buffer PB并进行洗涤；
9. 加入Buffer PW进行进一步洗涤，并最后用Buffer EB elution收集质粒。

注意事项：

• 使用前，将试剂盒中的RNA酶加入Buffer P1，并储存于4℃；
• 预热Buffer EB在65~70℃水浴中，以提升提取效率。

如需更多关于质粒载体的信息，欢迎咨询人生就是博-尊龙凯时。