人生就是博-尊龙凯时推出的新型检测试剂盒，基于探针法荧光定量PCR原理，具备多项优越特性，旨在提升生物医疗检测的效率与准确性。

产品特点

该检测试剂盒的主要特点包括：

• 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，简化操作流程。
• 高灵敏度：引物及其他组分经过优化，确保检测的灵敏度显著增强。
• 阳性对照：提供阳性对照，方便识别假阴性样品，提升检测可靠性。
• 高特异性：引物设计源于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
• 定性与定量检测：既可用于样品的定性检测，也支持定量检测，线性范围达到至少5个数量级。
• 数量充足：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，满足研究需求。
• 科研专用：本产品仅限于科研使用。

使用方法

一、DNA提取

使用用户自行选择的方法提取纯化样品DNA，此检测试剂盒与市场上多种核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为了保证实验的准确性，阳性对照的稀释需在独立区域进行，防止样品或试剂盒成分受到污染。具体步骤如下：

1. 标记6个离心管，依次命名为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标样，置冰待用。
4. 更换枪头，向6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标样，置冰待用。
5. 重复上述过程，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品，置冰待用。如不需制作标准曲线，直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制

若有N个待检测样品，则需准备N+2个qPCR管。向每个PCR管中加入相关成分（详细说明见使用说明书）。

四、添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管置于PCR扩增仪器相应位置进行扩增，具体扩增程序请参考使用说明书。

六、结果分析

若制作了标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，进而推算待测样品DNA浓度的log值。如果未制作标准曲线，按照以下标准判断结果：

• 阳性对照结果：Ct值<30，表现出明显的指数增长，呈现典型的S型曲线。
• 阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，未检测到明显的指数增长期和平台期。
• 样本检测结果：Ct值<35，指数增长明显，表明样本中检测出目标微生物，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表示未检测到目标微生物，结果为阴性；若Ct值在35-38范围，需进行复检，若结果仍在此范围且有明显增长，判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

请在低温条件下运输，并储存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

选择人生就是博-尊龙凯时的检测试剂盒，让您的生物医疗研究更加高效、精准。