3T3-L1细胞是一种源自小鼠胚胎成纤维细胞的细胞系，具备从前脂肪细胞向脂肪细胞分化的能力。1974年，Green和Kehinde首次分离出该细胞系，因其在体外转化为类脂肪细胞的特性，使其广泛应用于研究脂肪细胞的分化、代谢以及肥胖和糖尿病等代谢性疾病的机制。

诱导分化方案

为有效诱导3T3-L1细胞向脂肪样细胞分化，可按以下步骤进行：

第一阶段：细胞培养

1. 将细胞以每平方厘米3×10³个的密度接种于六孔板中。
注意事项：
（1）建议使用早代次细胞，以确保较好的分化效果。
（2）确保均匀铺板，避免影响分化的均匀性与比例。

2. 在DMEM培养基中培养细胞，直至达到70%的汇合度，并每2-3天更换培养基。
3. 3T3-L1细胞通常在DMEM高糖培养基中培养，添加10%小牛血清或胎牛血清以促进细胞生长。确保细胞在37℃、5% CO₂的环境中生长至90%的汇合度后，方可进行分化诱导。

第二阶段：分化诱导培养基的配制

培养基的制备应在无菌条件下进行，MDI（甲基异丁基黄嘌呤IBMX、地塞米松、胰岛素）诱导培养基和胰岛素培养基应新鲜制备。
实验步骤：
1. 配制储备溶液。将IBMX（50 mM）和地塞米松（1 mM）溶解于DMSO中。
2. 配制100mL MDI诱导分化培养基，需保证各成分浓度及体积准确。

第三阶段：3T3-L1细胞向脂肪样细胞的分化

1. 从培养箱中取出细胞培养板，去除DMEM培养基并向每孔中添加2-3mL MDI诱导培养基（记为第0天）。
注意：
（1）在添加诱导剂时，应轻柔操作，尽量避免对细胞的冲击。
（2）诱导培养基需提前37℃预热，减轻对细胞的刺激。

2. 第3天，去除MDI诱导培养基并用2-3mL胰岛素培养基替换。
3. 第6天，去掉胰岛素培养基并添加新鲜的DMEM。
4. 第7至10天，观察达到完全分化的脂肪样细胞。
5. 可通过油红O染色法检测分化效果，以监测脂质积累，或检测脂肪细胞特征性标志物的表达来跟踪分化进程。

通过这些步骤，3T3-L1细胞可以有效地诱导分化为成熟的脂肪样细胞。想要了解更多生物医学实验相关的信息，请访问人生就是博-尊龙凯时。在这里，我们提供更全面的生物医疗解决方案与产品信息，帮助您提升实验效果，助力您的科学研究。