人生就是博-尊龙凯时推出的猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）为临床病毒检测提供了重要支持。以下为该产品的详细使用说明。

产品名称

通用名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格

50T/盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光PCR原理，旨在定性检测猪流感病毒。该检测对猪流感病毒引发的流感及其并发症的诊断和治疗效果评估具有显著指导意义。

原理

本试剂盒专为猪流感病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。PCR反应在含有猪流感病毒基因组模板的环境下进行，并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测PCR过程中相应信号，实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含有猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期

需避光在-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 取咽喉拭子和鼻拭子，采集方法如下：
   1. 咽喉拭子：深入喉头及上颚裂来回刮3-5次以取得分泌液。
   2. 鼻拭子：深入鼻腔及周围取分泌液。
   3. 将咽喉拭子和鼻拭子放入含10mL生理盐水的离心管中。
   4. 理想采用合成纤维的拭子，杆子应为铝或塑料。
2. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品并置于离心管中待检。
3. 样本采集管应含有蛋白稳定剂的病毒运输液。
4. 避免样本间交叉污染。
5. 样本应立即检测，若不能立即检测，可在2-8℃下冷藏过夜；长期保存需冻存于-80℃以下。

检验方法

试剂准备

1. 从冰箱取出试剂盒，取出所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
2. 核算此次实验所需反应次数(n)，并参照下面的反应体系计算所需试剂量。
   n = 阴性对照数（1T）+ 阳性对照数（1T）+ 误差预留量（1T）+ 样本数。
3. 在无菌离心管中加入各试剂，混匀后瞬时离心，并将试剂分装至PCR反应管，按20μL/管分装量。

样本准备

使用QIAGEN或Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作请遵循其说明书。

加样

在准备好的PCR反应管中分别加入处理好的待测样本RNA各5μL，终体积为25μL/管。阴性对照和阳性对照管各加5μL试剂盒自带的阴性或阳性对照品。

PCR扩增

1. 将准备好的PCR反应管放置于实时荧光定量PCR仪的样品槽，并记录位置。
2. 根据下表设置核酸扩增相关参数进行PCR扩增：

参考值（参考范围）

1. 试剂盒有效性判定：
   1. 阳性对照需显示典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
   2. 阴性对照Ct值需＞38或无Ct值，结果应为直线或轻微斜线，无指数增长。
2. 标本结果判定：
   1. 阳性： Ct值≤35或显著指数增长。
   2. 可疑： Ct值在35-38之间，需重检。
   3. 阴性： Ct值＞38或无Ct值。

检验结果解释

检验方法的局限性

1. 低于本试剂盒最低检出限时，样本可能出现假阴性。
2. 样本在采集、运输、储存或处理不当可能导致RNA降解，出现假阴性。
3. 交叉污染可能导致假阳性结果。

产品性能指标

产品的最低检出限为103 Copies/mL，产品CV值≤3%。

注意事项

1. 实验室应遵循国家相关基因扩增实验室管理规范。
2. 为避免RNA降解，样本处理应在0-4℃进行并及时检测。
3. 各区域物品应专用，防止交叉污染，工作结束后应立即清洁工作台。
4. 避免吸取反应液时产生气泡，检查反应管是否盖紧以免液体蒸发。
5. 所有试剂在使用前应充分融化混匀，并瞬时离心。
6. 阴性和阳性对照需在首次使用前单独存放。
7. 避免直接用手接触PCR反应管，以防荧光干扰。
8. 使用过的吸头应直接放入废物缸，PCR反应管不可开盖后丢弃。
9. 仪器设置应符合说明书要求，不同批号试剂不得混用。

选择人生就是博-尊龙凯时的试剂盒，保障检测的准确性和有效性，为猪流感病毒的监测提供优质解决方案。