人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：推荐使用SMCM（ScienCell，1101）

传代方法：首次传代比例建议为1:2

备注：用无菌离心管收集培养基以进行对比培养。如对比结果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在细胞状态良好时灌满完全培养液并封好瓶口。此方式为细胞运输的最佳选择。在接收细胞时，首先用75%的酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，待细胞稳定后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议40x, 100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5%CO2的孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS缓冲液轻洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟；观察细胞是否已变圆并脱落。若是，迅速将培养瓶拿回操作台，轻轻敲击后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将所有培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟以收集上清进行对比培养。随后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，添加5ml完全培养基终止反应，反复离心并重悬，按1:2比例分瓶传代，补充完全培养基后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 细胞运输过程中出现丢失、瓶身破损或严重漏液，重发。
2. 细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内若大多数细胞未存活（需提供真实的细胞状态照片），可重发。
4. 若细胞在复苏后或常温发货下静置4小时未开封出现污染，重发。
5. 细胞活性问题，请在7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞当天及后两天内拍照，若三天后未告知则视为产品合格。若4-7天内出现问题需提供前三天的照片和详细步骤，与技术人员沟通后由其判断责任，并可重发。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染不重发。
2. 因客户操作不当导致的细胞状态不佳不重发。
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良不重发。
4. 未提供培养前三天照片的细胞状态不良不重发。
5. 在细胞培养过程中有其他处理的不重发。
6. 收到后2天内未告知问题不重发。
7. 其他情况依据具体情况而定。

本指南致力于保障细胞培养的成功，若您有任何疑问或需要帮助，请随时联系我们，人生就是博——尊龙凯时将竭诚为您服务。